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2023-11-26 18:17:07 Q1，我们WB实验结果为何出现2条带？
A:
通过与阴性样品的对比，可以确定该条带是否为杂带。
若该条带并非杂带，则该条带产生的可能原因有：
目的蛋白被修饰所产生的条带；
目的蛋白被剪切所产生的条带；
目的蛋白被降解所产生的条带；
如果是原核表达纯化的重组蛋白，可能是降解或非共价结合未被打断的二聚体所产生的条带。
Q2，为什么阴性样品也有疑似条带？
A:
阴性样品中内源的目的蛋白或敲除不完全的目的蛋白或未被敲除的目的蛋白isoform，或者是与目的蛋白大小相同的杂带。
Q3，腹水和小鼠血清有交叉反应，是否属于正常？如果纯化后是否能够解决这个问题？
A：
小鼠腹水得到的抗体肯定会对小鼠血清有亲和性，出现交叉现象属于正常，可以通过抗原亲和纯化得到特异性的抗体，较好改善交叉反应的现象（但由于纯化效率不可能达到100%，因此不能保证完全消除）
Q4，公司的WB是怎么做的？推荐的稀释比是多少？
A:
根据目的蛋白分子量选择合适的胶浓度，
根据所检测的样品及抗体数确定合适的验证模板，制SDS-PAGE胶/预制胶，垂直电泳，湿法转膜，丽春红染色确定转膜效果后进行WB验证，
常规定制抗体WB推荐稀释比例1：1000。
2023-11-26 19:00:19 
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