生产抗体免疫原怎么选择?
首先要确定表位,选择表位是通过自有的生物信息学软件对蛋白序列进行分析,根据凯靖以往上千个抗体的制备和验证经验,来选择出最合适的抗体制备表位。根据抗原设计的原则,得到不同表位的信息,我们选择软件分析分值较高的几个表位作为抗原,并将这些表位同时进行免疫,最终通过一定的筛选方案得到针对不同表位的高亲和力的单抗抗体。因此是一种快速、低成本、高效率地得到针对蛋白不同表位高亲和力抗体库的抗体制备技术,能够最大程度上提高抗体的各种实验应用成功率。
抗原表位(英语:antigenic epitope),简称“表位”,也称为“抗原决定簇”(antigenic determinant),是指抗原表面上决定抗原特异性的化学基团。抗原表位可被免疫系统(尤其是抗体、B细胞或者T细胞)所识别。抗体中能识别抗原表位的区域叫做“互补位”或“抗体决定簇”。尽管通常抗原表位是指外来蛋白质等物质的其中一部分,但只要能被自身免疫系统所识别的表位,也被归为抗原表位。
蛋白质抗原的表位根据它们的结构以及与互补位的交互作用,被分为构象表位和线性表位这两种类型。其中构象表位有抗原氨基酸序列中的不连续部分组成,因此互补位和抗原表位的交互作用是基于表面的三位特征和形状,或者是抗原的三级结构。大部分的抗原表位都属于构象表位。与此相反,线性表位是由一段连续的抗原氨基酸序列构成,与抗原的交互作用的基础是其一级结构。
免疫原的选择参考因素:特异性、抗体的应用
抗原类型 |
适用情况 |
优点 |
缺点 |
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蛋白 |
天然蛋白 |
构象/线性表位 |
结构正确、抗体易识别天然样本 |
表达量低,不易获得足够的免疫原,纯化有一定的难度 |
重组蛋白 |
构象/线性表位 |
产量高,表达纯化技术成熟 |
跟天然蛋白结构有差异 |
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多肽 |
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线性表位 |
容易合成、纯度高;修改特异性抗体;种属特异性;交叉抗体 |
低免疫原性,不具有天然结构 |
DNA |
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构象/线性表位 |
无需纯化蛋白,蛋白体内表达,更近天然结构 |
低免疫原性 |
细胞 |
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构象/线性表位 |
结构正确,抗体易识别天然样本 |
细胞表面蛋白种类复杂,靶蛋白免疫剂量偏低,影响免疫效果,难度大 |