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流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种高精密度的生物分析技术，它能够对细胞进行快速、准确的定量分析和分类。

在流式的样本处理中，外周血样本的正确处理是确保细胞活性和完整性的关键。流式细胞术主要通过检测细胞表面和内部标志物的荧光强度来分析细胞群体的特征。如果样本处理不当，细胞可能会发生变形、破裂或死亡，导致数据的失真和不准确；外周血样本的处理对荧光染料的标记效果也有直接影响。如果样本处理不当，可能会导致非特异性染色、背景荧光增加或者染料与细胞结合效率降低；此外，外周血样本的正确处理能够减少实验中的变异性，提升数据的一致性和重复性。

总之，正确处理样本是流式细胞术研究中不可忽视的重要环节。

今天给大家分享流式中外周血样本的正确处理方式，确保流式细胞术发挥最大效用。

外周血处理

1.1 PBMC 提取：

处理方式：

（1）将全血和PBS（1：1）混合待用；

（2）取一支无菌15ml离心管，加入2ml Ficoll（1.077g/ml）；

（3）将离心管倾斜45°，缓缓加入用2ml 稀释后的外周血（PBS与外周血1：1混合），2000rpm离心20min，升5降0；

（4）离心后可看见管内分三层，上层为血浆和PBS，下层主要为红细胞和粒细胞，中 层为淋巴细胞分离液。在上、中层界面出有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，即白膜层。（单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞）；

（5）取白膜层细胞于新的离心管中，加入10ml PBS，1500rpm离心10min（升7降7）；

（6）弃去上清，用1ml PBS重悬细胞，备用。

1.2裂红：

处理方式：

（1）使用1x裂红液按4：1比例加入抗凝血；

（2）上下混匀，避光孵育10min；

（3）4℃下300-500g离心5min，去上清；

（4）加入1xPBS重悬细胞沉淀，4℃下300-500g离心5min，去上清；

（5）重悬细胞沉淀，备用

保存条件：4℃

运输条件：湿冰  

注意事项：

1、细胞样本保存于4℃下，不宜过长，应当天完成测试。

2、远距离运输，需将细胞样本冻存于冻存液中，放入-80℃过夜，换用干冰运输。

3、采血时应采用抗凝方式采集，避免凝血。