很多初入流式的同学,可能都被流式仪器的操作和流式数据的分析所困扰。
但千里之行,始于足下,大部分人忽视的准确的样本处理才是流式的重要的第一步。
今天就和大家分享一下流式的样本处理方案。
Ficol全血分离
流式样本类型主要分为全血和组织。
全血的处理比较简单,分为直接裂红(常规细胞表面染色,例如CD3\CD4\CD8)和Ficol提取(胞内核内刺激,例如TH1/TH2/TH17的胞内因子检测);
组织样本的处理,分为机械研磨和酶解,相对来说难度较大。机械研磨对于细胞活性而言,影响较大;酶解方案,则需要根据不同的组织类型,进行相应的酶浓度配置和酶种类配置。
酶解主要流程
酶解方案的主要集中点
1、酶种类
2、酶浓度
3、作用时间(室温/37℃)
上述三个条件,相对建议小伙伴们搜索相应的文件,进行相关的实验摸索。市售的酶解试剂盒,虽然说是通用的,但针对不同组织样本,它的结果都不会不一样,即使都是肿瘤,但是是不同位置的肿瘤,其特点都会有所不同。