流式实验对照设置

2024-06-18 21:42:14

好了，介绍完流式的样本处理，那接下来就是染色部分的问题了，染色部分其实也是有蛮多学问的，例如我要做5色，10个样本，那我应该如何染色？只要染色10样本即可？

不要急，且听我娓娓道来。

首先，大家来看下流式染色设置情况：

空白对照

排除自发荧光，即不经荧光染色细胞内部荧光分子经光照发出的荧光。自发荧光信号为噪声信号。一般说来，细胞成分中能产生自发荧光的分子（核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强，如肿瘤细胞、粒细胞等；样本死细胞比例越高自发荧光越强。

补偿对照（单阳对照）
排除相邻通道荧光泄露。

同型对照

排除自发荧光和抗体非特异性结合荧光，抗体Fc段与细胞表面Fc受体的结合。
同型对照：与实验染色的单克隆抗体特异性无关的免疫球蛋白亚型
①相同种属来源

②相同免疫球蛋白及亚型

③相同荧光素标记

④相同剂量和浓度

⑤但由未免疫动物血清纯化而来

死活染色（组织样本推荐）

1、死细胞细胞膜破损，容易造成细胞结团
2、细胞膜断裂片段增多，容易和抗体结合，增加了非特异性染色

3、死细胞有比较大的自发性荧光，本底信号增加

那么我们再回到上面的问题上“我要做5色，10个样本，那我应该如何染色？”
答：同型对照1管（空白&同型）、死活染色1管、补偿对照5管（5个不同颜色）、样本管10管，总计17管
你答对了吗？

产品资讯